Výchozí metodikou pro test akutní toxicity na akvarijních rybách druhů Poecilia reticulata a Brachydanio rerio je soubor ISO norem: ČSN EN ISO 7346-1 (Statická metoda), ČSN EN ISO 7346-2 (Obnovovací metoda) a ČSN EN ISO 7346-3 (Průtočná metoda). Cílem testu je stanovení toxicity vodou vyluhovatelných látek z odpadu na ryby. Testovacím materiálem je akvarijní ryba Poecilia reticulata (živorodka duhová) či Brachydanio rerio (danio pruhovaný), které lze nahradit druhem Pimephales promelas. Při testech je potřeba pracovat v souladu se zněním Zákona č.246/1992 Sb. Na ochranu zvířat proti týrání a dále Vyhlášky Mze ČR č.311/1997 Sb. O chovu a využití pokusných zvířat.

Test probíhá při teplotě 22 °C ± 2 °C, bez aerace a bez krmení organismů. Zřeďovací vodou je pracovní roztok solí použitý v požadovaném objemu 100 ml na jednoho jedince. Počet testovaných organismů v jedné koncentraci je 3 až 10 kusů (v jedné sérii testu je vhodné nasadit vždy stejný počet). Test probíhá za uvedených standardizovaných podmínek po dobu 48 hodin, dle metodik ISO se prodlužuje až na 96 hodin. V průběhu testu se zaznamenává chování ryb, měří se pH, koncentrace rozpuštěného kyslíku a teplota. Provádí se předběžný test s rozpětím deseti koncentrací po pěti kusech ryb v každé koncentraci. Na základě zjištěných výsledků se provádí základní test ve třech paralelních stanoveních (10 koncentrací po 10 kusech ryb), z nichž se vypočítá hodnota letální koncentrace _96hLC₅₀ a do výsledků se uvede její průměrná hodnota. Správnost provedení testu je dána nepatrným rozdílem ve zjištěných dílčích LC₅₀, které se nesmí lišit o více než 30 %. Zjištění efektivní koncentrace je založeno na procentuální inhibici I_i v jednotlivých koncentracích v porovnání s kontrolou (pouze pracovní roztok s nasazenými organismy). Zjištěné hodnoty Ii se převedou na pravděpodobnostní (probitové) jednotky a tyto jednotky se spolu s odpovídajícími koncentracemi převedenými na logaritmy použijí pro sestrojení grafu, kde na ose x jsou logaritmy koncentrací a na ose y probitové jednotky. Lineární regresí se zjistí hodnota letální koncentrace LC₅₀.

  Grafy souvislostí do úrovně:      I       II       III