Krátkodobý test klíčivosti

Test byl vyvinut k testování účinku odpadních vod na závlahy. Při této zkoušce se využívá citlivosti klíčících semen hořčice bílé Sinapis alba (viz obr. 1a–b) v počátečních stadiích vývoje rostliny na jedovaté látky. Test probíhá po dobu 72 hodin (viz obr. 2a–b), při teplotě 20 °C ± 2 °C, bez osvětlení. Princip testu spočívá v kultivaci semen za standardních podmínek (viz obr. 3) v různých koncentracích toxické látky v Petriho miskách na podložce nasycené pracovním roztokem. Počet semen v jedné koncentraci je 30 kusů s požadavkem 5 ml roztoku na Petriho misku o průměru 120 až 140 mm. Pro každé ředění se připraví minimálně dvě paralelní stanovení. Do dvou Petriho misek se vloží filtrační papír s připravenými otvory pro umístnění semen (dodržení bezpečné vzdálenosti mezi jednotlivými semeny a zajištění tak neomezování jejich klíčení okolními semeny). Před vložením semen se filtrační papír napustí 5 ml testovaného roztoku, stejně se připraví i kontrola. Pomocí pinzety se do každého otvoru na filtračním papíru (viz obr. 4) vloží rovnoměrně velká, nezdeformovaná, nepoškozená a odlišně nezbarvená semena tak, aby jejich počet v jedné misce odpovídal 30. Po 72 hodinách se přesně změří délka kořene (viz obr. 5) každé rostliny u jednotlivých koncentrací. Pro každé ředění se vypočítá aritmetický průměr délky kořenů L v mm z obou paralelních stanovení a vypočítá se inhibice I_µ (popř. i stimulace, je-li inhibice růstu menší než 0) růstu kořene v toxické látce v porovnání s nasazenou kontrolou (viz obr. 6).

Zjištěné hodnoty I_i se převedou na pravděpodobnostní (probitové) jednotky a tyto jednotky se spolu s odpovídajícími koncentracemi převedenými na logaritmy použijí pro sestrojení grafu, kde na ose x jsou logaritmy koncentrací a na ose y probitové jednotky. Lineární regresí se zjistí hodnota inhibiční koncentrace _72hIC₅₀.

Krátkodobý test klíčivosti na semenech Sinapis alba lze doplnit i dlouhodobým pozorováním exponovaných klíčících semen (subchronická toxicita), viz dlouhodobý test na semenech.

	Obr. 1a: Průběh testu akutní toxicity na semenech hořčice bílé Sinapis alba.
	Obr. 1b: Porovnání délky kořene u klíčících semen hořčice bílé Sinapis alba.

	Obr. 2a: Průběh testu akutní toxicity na semenech hořčice bílé Sinapis alba, umístěných v Petriho miskách, čas 0 h a 24 h.
	Obr. 2b: Průběh testu akutní toxicity na semenech hořčice bílé Sinapis alba, umístěných v Petriho miskách, čas 48 h a 72 h.

Obr. 3: Umístění Petriho misek s nasazenými semeny v termostatu (bez světla a za laboratorní teploty).

Obr. 4: Pomůcky pro akutní test toxicity na semenech hořčice bílé Sinapis alba, pinzeta, měřicí pravítko, semena, Petriho miska s filtračním papírem, pipeta.

Obr. 5: Průběh testu akutní toxicity na semenech hořčice bílé Sinapis alba, semeno a porovnání délky kořene v čase 0 h až 72 h.

Obr. 6: Porovnání délky kořene hořčice bílé Sinapis alba mezi kontrolním vzorkem a testovanou látkou, která působila stimulaci růstu kořene ( v porovnání s kontrolou).