též pyrofosfát, anion kyseliny difosforečné, symbol PPi. Vzniká především při štěpení ATPligasami, tvořícími AMP (např. aminoacyl-tRNA-ligasy), ale také při replikaci a transkripci, kdy se z nukleosidtrifosfátů odštěpuje difosfát a nukleosidmonofosfát se začleňuje do rostoucí nukleové kyseliny. Ve všech buňkách je přítomen enzym pyrofosfatasa, který difosfát hydrolyticky štěpí.