Izolace a charakterizace biomakromolekul 2023/2024 B320010 2023/2024
Kursthemen
-
IZOLACE A CHARAKTERIZACE BIOMAKROMOLEKUL
Rozsah: 2/0 Zk
Vyučující: doc. Ing. Petra Lipovová, PhD.
Předmět navazuje na: Biochemie, Enzymologie
Doporučená literatura: Dr. Ing. K. Bílková, Prof. Ing. B. Králová, CSc.: Izolace biomakromolekul, Vydavatelství VŠCHT, 1997
Předmět je zaměřen na pochopení principu purifikačních technik používaných při izolaci biomakromolekul. Cílem je naučit posluchače navrhnout správný purifikační postup pro cílovou biomakromolekulu a charakterizovat ji. Tyto vědomosti naleznou uplatnění v mnoha oborech.
Obsah předmětu:
Úvod - zdroje enzymů, dezintegrace, membránové procesy
Srážení, extrakce a centrifugace
Základní rozdělení a instrumentace
Hydrofobní chromatografie a chromatografie na reversní
Tenkovrstvá chromatografie, sledování průběhu chromatografie a stanovení koncentrace bílkovin
Gelová permeační chromatografie, Ionexová chromatografie
Afinitní chromatogrefie + příprava rekombinantních proteinů
Úvod do elektroforetických metod
Typy elektroforetických metod
Cvičení – práce s programem protNLab
Cvičení – navržení postupu přípravy rekombinantního proteinu -
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
Zadání sekvencí 2023 Verzeichnis
Zde má každý z vás zadaný úsek DNA, který obsahuje jeden gen.
-
sekvence plasmidu pET19b Verzeichnis
-
2023/24 Návrh primerů pro přípravu vektoru k produkci rekombinantního proteinu Gegenseitige Beurteilung
V sekvenci, která vám byla přidělena najděte gen, který obsahuje, a identifikujte jaký protein kóduje. Dále máte za úkol navrhnout sadu primerů, pomocí kterých daný gen vložíte do plasmidu pET19b tak, aby produkovaný protein měl na N-konci histidinovou kotvu. K vložení použijte dvě metody - pomocí restrikčních endonukleas (při výběru dbejte na to, aby výsledný protein byl co nejméně modifikován) a Gibson assembly (vektor i inzert připravte pomocí PCR).
Poznámka: Kdo má s touto prací již zkušenosti, může si úkol udělat samostatně, kdo ne, což je asi většina, tak to bude předmětem cvičení 2.11.2023. Úkol bude řešen formou Workshopu, kdy vám 30.11.2023 bude náhodně přidělen opravovač. Splnění obou úloh (vypracování svého zadání i oprava spolužákova) bude podmínkou udělení známky. Vysvětlím na přednášce.
-
-
-