Osnova témat

  • Úvod

    Sbalit vše Rozbalit vše

    IZOLACE A CHARAKTERIZACE BIOMAKROMOLEKUL

    Rozsah: 2/0 Zk

    Vyučující: doc. Ing. Petra Lipovová, PhD.

    Předmět navazuje na: Biochemie, Enzymologie

    Doporučená literatura: Dr. Ing. K. Bílková, Prof. Ing. B. Králová, CSc.: Izolace biomakromolekul, Vydavatelství VŠCHT, 1997


    Předmět je zaměřen na pochopení principu purifikačních technik používaných při izolaci biomakromolekul. Cílem je naučit posluchače navrhnout správný purifikační postup pro cílovou biomakromolekulu a charakterizovat ji. Tyto vědomosti naleznou uplatnění v mnoha oborech.


    Obsah předmětu:
    Úvod - zdroje enzymů, dezintegrace, membránové procesy
    Srážení, extrakce a centrifugace
    Základní rozdělení a instrumentace
    Hydrofobní chromatografie a chromatografie na reversní
    Tenkovrstvá chromatografie, sledování průběhu chromatografie a stanovení koncentrace bílkovin
    Gelová permeační chromatografie, Ionexová chromatografie
    Afinitní chromatogrefie + příprava rekombinantních proteinů
    Úvod do elektroforetických metod
    Typy elektroforetických metod  
    Cvičení – práce s programem protNLab
    Cvičení – navržení postupu přípravy rekombinantního proteinu

  • Téma 1

  • Téma 2

  • Téma 3

  • Téma 4

  • Téma 5

  • Téma 6

  • Téma 7

  • Téma 8

  • Téma 9

  • Téma 10

  • Téma 11

  • Téma 12 - Úkol

    • Zadání sekvencí 2023 Složka

      Zde má každý z vás zadaný úsek DNA, který obsahuje jeden gen.

    • sekvence plasmidu pET19b Složka
    • 2023/24 Návrh primerů pro přípravu vektoru k produkci rekombinantního proteinu Workshop

      V sekvenci, která vám byla přidělena najděte gen, který obsahuje, a identifikujte jaký protein kóduje.  Dále máte za úkol navrhnout sadu primerů, pomocí kterých daný gen vložíte do plasmidu pET19b tak, aby produkovaný protein měl na N-konci histidinovou kotvu. K vložení použijte dvě metody - pomocí restrikčních endonukleas (při výběru dbejte na to, aby výsledný protein byl co nejméně modifikován) a Gibson assembly (vektor i inzert připravte pomocí PCR).

      Poznámka: Kdo má s touto prací již zkušenosti, může si úkol udělat samostatně, kdo ne, což je asi většina, tak to bude předmětem cvičení 2.11.2023. Úkol bude řešen formou Workshopu, kdy vám 30.11.2023 bude náhodně přidělen opravovač. Splnění obou úloh (vypracování svého zadání i oprava spolužákova) bude podmínkou udělení známky. Vysvětlím na přednášce.

  • Téma 13